PCR analýza pro hepatitidu C kvalitativní interpretace výsledků

Vzhledem k asymptomatickému průběhu a vysoké pravděpodobnosti přenosu infekce HCV je diagnóza v raných stádiích patologie velmi důležitá. Nejpřesnější je formulace polymerázové řetězové reakce. Na rozdíl od metod detekce sérologických markerů je PCR málo závislá na doprovodných nemocech a obecném stavu těla pacienta. Pokud je však virus hepatitidy C potvrzen, je nutná kvantitativní analýza, jejíž dekódování provádí lékař.

HCV je závažné onemocnění, které vyžaduje závažné nákladné a nebezpečné nežádoucí účinky při léčbě. Diagnóza se proto nikdy neprovádí na základě výsledků jedné studie. Pokud je podezření na virové onemocnění, musí pacient podstoupit několik testů. Aby se však předešlo zbytečným nákladům a ztrátě času, provádějí se krevní testy a instrumentální vyšetření postupně.

Hlavní fáze diagnostického procesu jsou uvedeny v tabulce:

Průběžný výzkumVýkonnostní cíle
Biochemická analýza krevních a jaterních testůUmožňuje vyhodnotit funkční aktivitu jater, hladinu bilirubinu, ukazatele jaterních transamináz. Překročení normy dvakrát nebo více znamená přítomnost nemoci
Klinické testy krve, moči a stoliceTyto studie jsou nespecifické, ale výsledky mohou prokázat přítomnost zánětlivého procesu a posoudit celkový stav pacienta. Detekce bilirubinu v moči, změna barvy stolice hovoří ve prospěch poškození jater
Enzymově vázaný imunosorbentový test (ELISA)Umožňuje vám určit přítomnost virové infekce v těle a její formu (akutní nebo chronickou). Nevýhodou studie je pravděpodobnost falešných výsledků.
Polymerázová řetězová reakceDrahé, obtížně proveditelné, ale zároveň nejpřesnější diagnostická metoda pro HCV. Umožňuje vám potvrdit přítomnost viru v lidském těle, kvantifikovat úroveň kopií RNA, určit genotyp HCV
Instrumentální vyšetření jaterJe nutné provést ultrazvuk břišních orgánů, stanovit stadium fibrózy, posoudit závažnost cirhózy, vyloučit hepatocelulární karcinom

Lékař provádí konečnou diagnózu pouze na základě výsledků uvedených ve všech studiích. Některá léčiva, například hepatoprotektory, vitaminy, jsou uvedena již na začátku diagnostického procesu. Cílená antivirová činidla jsou však předepsána po obdržení všech dat.

Co je to PCR?

Technika polymerázové řetězové reakce je známa již dlouhou dobu a byla úspěšně použita k diagnostice řady virových onemocnění a HCV není výjimkou..

V současné době existuje několik metod pro nastavení PCR, ale v zásadě se tento proces skládá z několika fází:

  1. Zničení dvojitého řetězce DNA pod vlivem tepla nebo určitých chemikálií.
  2. Spojení tzv. Primerů, zbytků nukleotidového řetězce RNA viru, s DNA oddělenou bází DNA (ve většině moderních testovacích systémů se používají 5'-NTR oblasti HCV genomu).
  3. Specifický enzym, DNA polymeráza, rozpoznává primer, vyvolává přidání dalších nukleotidových zbytků.

Na konci třetí fáze polymerázové řetězové reakce se DNA mezi dvěma primery zdvojnásobí a následně je genom exponenciálně amplifikován (2–4–8 atd.).

Citlivost moderních testovacích systémů je 10–50 kopií RNA v 1 ml krve.

Dekódování PCR na hepatitidu C by měl provádět kvalifikovaný odborník. V souladu s mezinárodním standardem WHO se pro kvantifikaci virového genomu použije vzorek krevní plazmy v lyofilizované formě obsahující RNA prvního virového genotypu v koncentraci 105 IU / ml..

Současně je věnována pozornost kvantitativním jednotkám, ve kterých jsou výsledky výzkumu vyjádřeny. Počet kopií HCV RNA je obvykle udáván absolutně nebo logaritmicky. Poté je v souladu s mezinárodními standardy převeden tento údaj pomocí zvláštního koeficientu na mezinárodní jednotky (IU). Konečné výsledky jsou tedy uvedeny v IU / ml.

K provedení kvantitativní studie se používají různé testovací systémy a metody pro formulaci polymerázové řetězové reakce. Některé jsou určeny k měření plazmatické nebo sérové ​​virémie. Jiné jsou účinnější a indikativnější při studiu plné krve..

Mluvit o normě při interpretaci výsledků uvedených v laboratorní podobě není zcela správné. Faktem je, že u zdravého člověka v těle není virová RNA a přítomnost částic HCV, bez ohledu na kvantitativní ukazatel, naznačuje infekci. V budoucnu pomocí PCR vyhodnotíme účinnost léčby. S negativním výsledkem po 4 týdnech užívání léků a poté po ukončení antivirové terapie (po dobu 48 týdnů) mluví o zotavení.

Druhy výzkumu

Provádění polymerázové řetězové reakce zahrnuje stanovení nejen přítomnosti HCV RNA v krvi, ale také stanovení počtu kopií viru a analýzu struktury genomu. Díky těmto schopnostem je PCR jednou z nejinformativnějších a nejpřesnějších metod pro diagnostiku virové hepatitidy C.

Všechny praktické metody pro formulaci polymerázové řetězové reakce jsou uvedeny níže v pořadí chování (každý následující test je předepsán s pozitivním výsledkem předchozího):

  1. Vysoce kvalitní PCR analýza pro hepatitidu C se provádí pouze pro detekci RNA viru v krvi.
  2. Kvantitativní PCR test. Dešifrování se provádí v souladu s obecně uznávanými standardy. V závislosti na výsledku může být virologická zátěž nízká, střední nebo vysoká. Tento indikátor je jedním z prediktorů výsledku léčby HCV..
  3. Genotypizace (v mnoha soukromých laboratořích je nabízena ve spojení s kvantitativní analýzou, která snižuje celkové náklady). Určení genotypu HCV se provádí jednou z arabských číslic (1 až 6). Na území Ruska je častěji detekován genotyp 1 nebo 3, o něco méně často - 2, 4–6 jsou diagnostikovány v ojedinělých případech. Dříve, při použití léčebných režimů s interferonem, různé HCV určovaly trvání a účinnost terapie. Moderní antivirové látky mají široké spektrum účinku, ale některé z nich jsou předepisovány pouze s 1–4 genotypy HCV.

Genotypizace se provádí pouze jednou, před zahájením léčby. Jak se berou léky, jsou pro lékaře nezbytné kvantitativní normy hepatitidy C, aby vyhodnotily účinnost antivirotik. Po průběhu léčby se provede kvalitativní studie PCR..

Vlastnosti kvantitativní analýzy

Kvantitativní analýza pomocí PCR se provádí za účelem stanovení virové zátěže. Tímto pojmem se rozumí počet kopií RNA patogenu v 1 ml krve.

Díky takové studii bude lékař schopen posoudit řadu faktorů, které hrají klíčovou roli jak v průběhu onemocnění, tak ve výsledku terapie. To:

  • pravděpodobnost komplikací (cirhóza a hepatocelulární karcinom), protože čím aktivnější je patologický proces, tím vyšší je riziko jaterních patologií již v počátečních stádiích hepatitidy C;
  • účinnost standardního léčebného režimu (ve vážných případech je vyžadováno další předepisování antivirových látek);
  • riziko pro ostatní (zejména pokud pacient patří do sociálně bezpečných částí populace, má rodinu, děti);
  • riziko extrahepatických komplikací (rozvoj autoimunitních chorob, poškození nervového systému, kardiovaskulárního systému atd.).

Kvantifikace HCV RNA je také důležitá pro sledování účinnosti léčby. Jak pokračujete v užívání antivirových léků, jejich počet klesá. Cílem terapie je dosáhnout negativního výsledku kvalitativní analýzy pomocí PCR..

Indikace

Před výskytem velkého počtu soukromých laboratoří, kde pacient může provádět téměř jakoukoli analýzu bez dokumentů od lékaře, byl v určité fázi diagnózy nebo léčby dán pokyn k provedení kvantitativní PCR..

V souladu s normami a protokoly WHO jsou indikací pro takovou studii:

  • pozitivní sérologické markery HCV (anti-HCV Total, přítomnost imunoglobulinů třídy G a / nebo M);
  • pozitivní výsledek kvalitní PCR;
  • monitorování léčby.

V případě potřeby se může pacient nezávisle obrátit na soukromou kliniku a provést podobnou studii. Ale v případě absence hepatitidy C je takový laboratorní test považován za nevhodný.

Jaké stádia choroby jsme

Chcete-li určit virové zatížení, následující data:

  • před zahájením léčby (pravděpodobně současně s genotypizací);
  • 4 týdny léčby (negativní údaje naznačují rychlou virologickou odpověď a predikci prediktivních výsledků);
  • poslední týden terapeutického cyklu (12 nebo 24, v závislosti na vybraném schématu), negativní výsledek potvrzuje účinnost terapie, pozitivní vyžaduje další léčbu, ale s použitím jiných léků;
  • 24 a 48 týdnů po ukončení léčebného cyklu (bez ohledu na jeho trvání), absence virové zátěže potvrzuje zotavení.

Studie se navíc provádí pouze podle indikací (například zhoršení zdraví, chyby v užívání tablet, identifikace průvodních infekcí atd.). PCR nevylučuje potřebu dalších analýz - klinické studie krve a moči, jaterní testy, ultrazvuk a další.

Jak se připravit na studii

Aby dekódování analýzy PCR nebylo chybné, je nutné řádně se připravit na odběr krve. Až na některé výjimky se pravidla neliší od pravidel v jiných studiích..

Je to nutné:

  • darovat krev přísně na lačný žaludek (poslední jídlo 12 hodin před návštěvou laboratoře);
  • postup se provádí ráno (co nejdříve);
  • v den analýzy, po probuzení, můžete pít pouze vodu; čaj, káva, soda a / nebo sladké nápoje, džusy atd. kontraindikované;
  • 3-5 hodin před darováním krve nemůžete kouřit;
  • pokud není možné přestat užívat nějaké léky, sdělte názvy léků, které se mají vzít, laboratornímu asistentovi a lékaři, který údaje interpretuje.

Přítomnost hepatitidy C již znamená úplné odmítnutí alkoholu a přísnou stravu (tabulka č. 5). Pokud je však analýza prováděna ve fázi diagnózy, 5–7 dní před odběrem krve, je nutriční sledování povinné, s výjimkou jaterních produktů a alkoholu.

Rozdělení kvantitativní analýzy na hepatitidu C

Obvykle, když pacient obdrží výsledky testů po ruce, formulář zobrazí normální hodnoty, získané hodnoty a krátkou interpretaci. Dekódování krevního testu na hepatitidu C by však měl provádět pouze lékař. Kvantitativní PCR je jedním ze stádií diagnostiky, proto lékař porovnává údaje s dříve získanými výsledky.

V závislosti na získaných indikátorech je stanoven stupeň virové zátěže nebo úplná absence HCV RNA v těle.

Je-li provedena kvantitativní analýza hepatitidy C, provede se dešifrování v souladu s tabulkou:

Hodnota indikátoruÚroveň virové zátěže
Nebyl detekován žádný RNA virus (nebo počet kopií je menší než citlivost testovacího systému)Normálně je člověk zdravý nebo byla analýza provedena během inkubační doby patologie
1,8 × 102–7,9 × 105 IU / mlNízké virové zatížení. Označuje nedávnou infekci, latenci nebo antivirovou účinnost.
8 × 102–2,3 × 107 IU / mlStřední virová zátěž. Obvykle se uvádí v chronické formě HCV. Prognóza léčby je příznivá, na základě doporučení lékaře
2,4 x 107 IU / ml a vyššíVysoká virémie. Těžké komplikace (až po rakovinu jater) jsou velmi pravděpodobné

Aby bylo možné přesně dešifrovat analýzu a zabránit chybným výsledkům, je možné vyhodnotit data kvantitativní PCR pouze po identifikaci sérologických markerů kvalitativní PCR. U IFA je nutně indikován pozitivní koeficient. Zohledněte také údaje z ultrazvukového vyšetření, elastografie a biopsie, pokud byla studie provedena.

Norma

Kvantitativní analýza PCR se provádí pouze tehdy, je-li na hepatitidu C pozitivní jiný krevní obraz.

Dosažení negativního výsledku je možné s:

  • samoléčení (v lékařské literatuře existují statistiky, podle kterých asi 15% infekcí HCV zůstává bez povšimnutí, lidský imunitní systém virus zcela eliminuje);
  • časná virologická odpověď (při hodnocení výsledků během antivirové terapie);
  • v případě chybných údajů z předchozích studií (je nepravděpodobné, protože testy ELISA, vysoce kvalitní PCR a jaterní testy se obvykle předepisují jako první).

Pokud je proveden test na hepatitidu C k posouzení virologické zátěže, přepis provede lékař. Předpokládá se, že normální indikátory jsou úplná absence HCV RNA v krvi. Aby se vyloučila latentní infekce, doporučuje se ji opakovat za několik týdnů..

Jaký krevní obraz znamená hepatitidu C

Před zahájením diagnostického vyšetření musíte přesně vědět, co krevní obraz znamená HCV. Na jedné straně to pacientovi umožní vyhnout se zbytečným finančním výdajům za zbytečné analýzy, na druhé straně to ušetří čas.

U hepatitidy C jsou tedy indikativní následující údaje:

  • pozitivní ELISA bez ohledu na detekovanou třídu protilátek; ale tento parametr je hodnocen na pozadí jiných výsledků, protože některé vlastnosti imunitního systému mohou ovlivnit přesnost studie;
  • pozitivní kvalitativní PCR (citlivost a specificita metody dosahuje 100%);
  • stanovení počtu kopií viru během kvantitativní PCR.

Nepřímými příznaky HCV jsou nadměrné jaterní transaminázy, bilirubin, leukocytóza, zrychlená ESR, přítomnost bilirubinu v moči.

Při dekódování výsledků se bere v úvahu snížení, protože hepatitida C je v analýzách uvedena. Virová zátěž je obvykle uvedena v IU / ml nebo IU / ml a RNA viru je anglická zkratka RNA HCV.

Existuje falešná zkouška

Na rozdíl od ELISA je pravděpodobnost falešného výsledku PCR prakticky nulová. Chyby jsou možné pouze v důsledku lidského faktoru, což je v rozporu s pravidly pro odběr vzorků krve, uchovávání vzorků a přímé provádění studie.

Výhody kvantifikace PCR

Specialisté v oboru hepatologie zdůrazňují, že kvantitativní PCR nemá analogy a je jednou z hlavních studií pro pacienty s HCV. Analytický modul minimalizuje pravděpodobnost falešně pozitivních nebo falešně negativních výsledků..

Získání výsledků trvá několik dní. Odběr krve nevyžaduje zvláštní přípravu, je možný téměř v každé klinické laboratoři a není doprovázen významnou bolestí. Hlavní výhodou této analýzy je však její vysoká přesnost, dosahující 100%.

Kvalitativní analýza PCR pro hepatitidu C

Hepatolog

Související specializace: gastroenterolog, terapeut.

Adresa: St. Petersburg, Academician Lebedev St., 4/2.

Hepatitida je závažné onemocnění, které má mnoho příčin. Jádrem jeho vývoje je přímé nebo nepřímé poškození jater. Vzhledem k jeho důležitosti pro celý organismus lze jen hádat, jak je patologie obtížná. V tomto článku budeme podrobněji analyzovat průběh a laboratorní diagnostiku hepatitidy C.

Příčinou onemocnění je virové činidlo, které se týká patogenů obsahujících RNA. Má charakteristický rys - schopnost mutovat, to znamená změnit jeho strukturu. V důsledku toho infekce uniká útoku imunitního systému a ve většině případů vede k chronickému zánětu v játrech.

Vzhledem k existenci různých podtypů viru by měl být výběr léčiv prováděn s ohledem na výsledky genotypizace. Přes dlouhou studii nemoci a strukturálních rysů HCV nebylo dosud možné vyvinout specifickou vakcínu proti nemoci.

Potíže při včasné diagnóze jsou asymptomatická hepatitida, v jejímž důsledku člověk chodí k lékaři ve fázi cirhózy. K včasnému odhalení choroby je nutné pravidelné lékařské vyšetření. Pouze prostřednictvím laboratorních krevních testů je možné detekovat HCV a zabránit infekci ostatních. Faktem je, že nositel infekce po dlouhou dobu nemůže hádat o patologii a pokračovat v přenosu viru na zdravé lidi.

Přenosové cesty

Virus se ve většině případů šíří krví, protože obsahuje nejvyšší koncentraci patogenních látek. Infekce se tak přenáší:

  • s hemodialýzou;
  • když je injikován infikovanou jehlou;
  • v procesu boje, když je poškozena kůže a dochází ke kontaktu s krví;
  • s krevní transfuzí (krevní transfúze).

Pravděpodobnost infekce intimity je zanedbatelná, protože spermie a vaginální výtok obsahují malé množství patogenů. Riziko infekce se významně zvyšuje s porušením integrity genitální sliznice. To je pozorováno u agresivního a análního sexu.

Pokud jde o vertikální metodu přenosu infekce, provádí se v procesu porodu. V období těhotenství nemůže patogen proniknout placentou do embrya. Při přirozených porodech se patogenní původce přenáší na dítě, když je jeho kůže poraněna při pozorování kontaktu s krví matky..

Poté, co patogen vstoupí do zdravého těla, začíná syntéza protilátek, které jsou ochranou proti infekci a patří do imunitních struktur. Jsou nalezeny během počáteční studie u člověka pomocí ELISA.

Pro potvrzení diagnózy se pacient podrobí polymerázové řetězové reakci. Jedná se o analýzu k identifikaci genetického materiálu patogenního agens a určení virové zátěže..

Laboratorní diagnostika hepatitidy C

Laboratorní diagnóza začíná enzymatickým imunosorbentovým testem. Jeho hlavním úkolem je detekovat protilátky produkované proti patogenu. Jeho účinnost je téměř 95%. Díky této studii je v předklinické fázi možné identifikovat nosič viru a odeslat jej k dalšímu zkoumání.

Kvalitativní test ELISA ukazuje na přítomnost nebo nepřítomnost imunoglobulinů v krvi pacienta. Jeho výsledek může být „pozitivní“ nebo „negativní“. Po obdržení první odpovědi je osoba odeslána na další vyšetření - PCR. Jeho cena závisí na kvalitě reagencií a laboratoře. Náklady na polymerázovou řetězovou reakci mohou dosáhnout 4 000 rublů.

Vlastnosti PCR

Pomocí polymerázové řetězové reakce nám i malé množství biologického materiálu umožňuje odhadnout virovou zátěž v krvi, tj. Vypočítat koncentraci patogenů v jednom mililitru kapaliny.

S příchodem PCR se diagnostika hepatitidy stala mnohem jednodušší. Analýza umožňuje identifikaci HCV RNA, stanovení fáze infekčního procesu a infekčnosti nosiče viru.

Existuje několik druhů genetické diagnostiky:

  1. kvalitativní analýza PCR pro hepatitidu C - potvrzuje přítomnost nebo nepřítomnost HCV v krvi subjektu:
  2. kvantitativní, díky čemuž můžete spočítat koncentraci virů a určit fázi nemoci. Výsledek je uveden v IU / ml nebo v kopiích / ml (v závislosti na laboratoři);
  3. genotyping - nezbytné pro stanovení HCV genotypu. To je nutné pro přesný výběr léků, které budou v tomto případě nejúčinnější. Analýza nepřímo ukazuje závažnost patologického procesu v játrech. U genotypu třetího patogenu je tedy nejčastěji pozorována steatóza, jejíž vývoj je založen na hromadění tuku v hepatocytech (jejích buňkách). Navíc typ viru ovlivňuje výsledek a trvání terapeutického cyklu..

Kvalitativní analýza PCR pro hepatitidu C

Nejprve se v laboratoři zkoumá biologický materiál na přítomnost HCV RNA. Je důležité si uvědomit, že kvalitativní analýza hepatitidy C má určitou úroveň citlivosti, a proto nemůže vždy poskytnout správnou odpověď. V tomto případě se doporučuje opakovaná laboratorní diagnostika pomocí jiných činidel..

K získání spolehlivých výsledků by měly být použity testovací systémy s citlivostí nejméně 50 IU / ml..

Diagnostický výsledek může být „pozitivní“ nebo „negativní“. Pokud se patogen nenachází v krvi, studie končí. Pokud je ve vzorku detekována patogenní látka, provede se kvantitativní výpočet virové zátěže..

Falešně negativní odpověď se získá, když je narušen technologický proces, například aktivní složky, které inhibují tvorbu kopií patogenu, vstupují do životního prostředí. Není tedy možné zobrazit skutečný obraz krve, díky níž není diagnostikována lidská infekce..

Falešně pozitivního výsledku lze získat, pokud byla zkumavka pro sběr biologického materiálu, jakož i prostředí pro studii kontaminovaná. Kromě toho je taková analytická odpověď možná u smíšených infekcí, kdy je játra ovlivněna několika viry, například hepatitidou C a D.

Indikace pro kvalitativní výzkum

Lékař může předepsat pacientovi kvalitativní studii pro identifikaci RNA viru hepatitidy C:

  • po obdržení pozitivní nebo pochybné odpovědi na enzymatický imunotest;
  • ověřit diagnózu;
  • stanovení virové zátěže;
  • stanovení fáze onemocnění;
  • diagnostika smíšené infekce. Hepatitida C často postihuje játra současně s virem D;
  • stanovení terapeutických taktik založených na genotypu patogenu;
  • hodnocení dynamiky změn během léčby antivirovými léky.

Výhody polymerázové řetězové reakce zahrnují:

  1. vysoká citlivost techniky, která umožňuje zjistit skutečnost infekce v předklinickém stadiu;
  2. identifikace genetického materiálu patogenu, a nikoli protilátek proti němu;
  3. schopnost stanovit podtyp patogenního agens;
  4. vysoká diagnostická rychlost, protože není nutné naočkovat materiál na živné médium, ale stačí použít specifické testovací systémy. Osoba dostane výsledek po 5 hodinách;
  5. univerzálnost. Analýza umožňuje identifikovat jakýkoli genetický materiál (RNA, DNA). Díky tomu může lékař potvrdit hepatitidu C a další typy onemocnění (B);
  6. možnost detekce latentní infekce.

Kvantitativní výzkum

Při krevním testu pomocí polymerázové řetězové reakce je možné vypočítat počet patogenů ve stálém objemu biologického materiálu. Ukazatel je uveden v IU / ml. Díky analýze je možné stanovit stupeň infekčnosti pacienta, určit fázi infekčního procesu a také zhodnotit účinnost lékové terapie.

Na základě PCR rozhodne specialista, které dávky léků mohou blokovat množení patogenů. Kromě toho se stanoví délka antivirové léčby a prognóza života. Je důležité si uvědomit, že testovací systémy jsou vysoce citlivé, proto tato metoda umožňuje potvrdit infekci osoby i v předklinickém stadiu.

Genotypizace

Vzhledem ke schopnosti patogenu mutovat je jeho genotyp nezbytný k určení taktiky léčby a výběru antivirových léčiv. Například léčba hepatitidy HCV 1 trvá 48 týdnů, s pozitivní dynamikou pozorovanou pouze v 60% případů. Genotypy 2 a 3 mají příznivější prognózu. Antivirová léčiva jsou předepisována na 8 měsíců a jejich účinnost dosahuje 85%.

Podle statistik jsou ve většině případů HCV 1, 2 a 3 zaznamenány v Ruské federaci.

Při dekódování laboratorního testu může být taková odpověď uvedena - „není zadána“. To znamená, že virus cirkuluje v oběhovém systému pacienta, který testovací systém nemůže rozpoznat. Výsledek analýzy v tomto případě ukazuje na infekci osoby patogenem atypickým pro danou zeměpisnou oblast.

Jak získat spolehlivé výsledky?

Aby mohla kvalitativní studie PCR detekovat RNA patogenu hepatitidy C a ukázat správné výsledky, je nutné splnit požadavky na přípravu pro laboratorní diagnostiku:

  1. odběr krve se provádí na lačný žaludek a „hladová“ doba by neměla být kratší než 8 hodin;
  2. dva dny před studií se doporučuje přestat pít alkohol a odmítat kořenitá, mastná a uzená jídla;
  3. zrušit zavádění léků, které snižují krevní srážlivost, například heparin. Jsou-li tyto léky předepsány ze zdravotních důvodů, je třeba na to upozornit lékaře. Kromě toho by si měl být odborník vědom užívání dalších léků, které mohou ovlivnit výsledek laboratorního testu;
  4. v předvečer sběru biologického materiálu by neměly být prováděny fyzioterapeutické procedury a vystavujte se těžké fyzické námaze.

Výsledky analýzy mohou být ovlivněny nejen osobou, která daruje krev, ale také dalšími faktory, konkrétně:

  • špatný odběr krve;
  • nedodržování doporučení pro přepravu biologického materiálu;
  • nedostatečné školení laboratorních pracovníků;
  • nedodržení výzkumné techniky;
  • zavedení antikoagulancií (heparin) v předvečer odběru krve. Tato skupina léků snižuje koagulaci, čímž zpomaluje práci reagencií.

V různých laboratořích se diagnostická odpověď může mírně lišit, tyto chyby však neovlivňují konečný výsledek studie..

Zvláštní pozornost je věnována typům testovacích systémů používaných v laboratoři. Často jsou preferována činidla s vysokou citlivostí. To je důležité pro pacienty s nízkou virovou zátěží, protože je obtížné je detekovat..

Jak často je laboratorní testování?

Primární polymerázová řetězová reakce je prováděna u lidí, kteří při enzymatickém imunosorpčním testu detekovali protilátky proti původci hepatitidy. V takovém případě je předepsáno potvrzení skutečnosti o infekci osoby a stanovení stadia nemoci. Kromě toho analýza umožňuje určit subtyp viru, který je zvláště důležitý pro výběr léků.

Další období pro povinné laboratorní testování je 3 měsíce od zahájení antivirové terapie. Diagnóza umožňuje vyhodnotit účinnost léků, upravit dávku nebo je nahradit.

Kromě základních testů může být PCR prováděna dodatečně ve 4 a 24 týdnech od začátku léčby. Pozitivní prognóza onemocnění je potvrzena snížením virové zátěže po třech měsících léčby. Například by se měl snížit z 1 milionu IU / ml na několik set tisíc.

Pokud koncentrace patogenních látek v krvi zůstává na stejné úrovni nebo se mírně zvyšuje, naznačuje to neúčinnost antivirových látek a vyžaduje náhradu. Pomocí PCR na konci léčby je možné potvrdit zotavení pacienta.

Pro správnou interpretaci výsledků laboratorní diagnostiky je nutná konzultace s hepatologem nebo specialistou na infekční choroby. Vzhledem k vysoké četnosti falešných odpovědí v testu ELISA se analýza používá výhradně pro primární screening. Pro důkladnější vyšetření pacienta se používá polymerázová řetězová reakce..

Přesné testy na hepatitidu C.

Přesná diagnóza hepatitidy C se provádí pouze v laboratoři prostřednictvím krevních testů pacienta. K tomu se používá několik technik:

  • enzymatický imunosorbentový test - ELISA, který vám umožní určit přítomnost protilátek proti hepatitidě C. V různých stádiích vývoje onemocnění je v krvi detekováno několik typů protilátek - IgM, IgG;
  • polymerázová řetězová reakce - PCR je efektivní a přesná 100% analýza hepatitidy C, protože umožňuje přímou identifikaci RNA viru hepatitidy C, a nikoli protilátek proti ní.

Za různých podmínek mohou obě tyto studie poskytnout falešně pozitivní a falešně negativní výsledky testu, takže pro nejpřesnější diagnózu může pouze kombinace těchto výsledků poskytnout přesný obrázek o diagnóze. Pokud metoda ELISA přinesla pozitivní výsledek, pak je definitivně provedena analýza PCR na hepatitidu C. Pokud také dává pozitivní výsledek, je diagnóza potvrzena a pacientovi je sděleno, že má hepatitidu C. Pokud je test ELISA pozitivní a PCR je negativní, to znamená, že je člověk zdravý! Často k tomu dochází po léčbě hepatitidy C nebo po přenosu hepatitidy C v akutní formě, která je tělem zcela vyléčena..

Takové případy také nastávají. Přibližně 15–20% pacientů může onemocnět, aniž by si to uvědomili, a aniž by se museli snažit o vlastní uzdravení!

Po léčbě hepatitidy C se pravidelně rok provádí test PCR, aby se zkontrolovala stabilní virologická odpověď. Kromě kvalitativního krevního testu pomocí PCR se provádí krevní test na virovou zátěž a genotypizaci viru hepatitidy C. Normální hodnotou je absence virové zátěže. Genotyp viru se po léčbě může změnit. To naznačuje, že převažující genotyp byl úspěšně vyléčen, ale nyní je třeba léčit další. Byly případy, kdy pacient měl tři genotypy hepatitidy C. To vyžaduje vážnou dlouhodobou léčbu. Analýza genotypu viru ukazuje pouze přítomnost genotypu viru hepatitidy C převládajícího v krvi.

Hepatitida C, jak ho porazit?

Abyste porazili hepatitidu C, nemusíte sedět a doufat v zázrak nebo alternativní medicínu, ale jděte na hepatologickou kliniku, kde zkušení lékaři léčí hepatitidu C. Zkušenosti lékaře mají zásadní význam pro úspěch terapie, protože pouze léčebné teorie toto komplexní virové onemocnění nestačí! Dnes se kromě klasické metody léčby virové hepatitidy C - interferonu a ribavirinu používá nejnovější léčebný režim nové generace léčiv - Harvoni. Jedná se o produkt farmaceutické společnosti z Ameriky, která zahrnuje dva nové léky - Sofosbuvir a Ledipasvir. Mají zcela odlišný účinek na virus, což umožňuje rychlou a účinnou léčbu..

Hepatitida C a zácpa

Virová hepatitida C způsobuje poruchy gastrointestinálního traktu. U pacientů se může objevit nevolnost, hořkost v ústech, pálení žáhy, poruchy stolice - průjem nebo zácpa, stejně jako nadýmání a nadýmání..

Kvalitativní analýza hepatitidy C: přepis

Příčinou vývoje virové hepatitidy C je infekce patogenem, který patří do čeledi Flaviviridae. Mezi infekcí a začátkem produkce protilátky je detekován dlouhý časový interval, který neumožňuje včasnou diagnózu choroby pomocí enzymatického imunosorbentového testu.

V případě podezření na infekci se provádí analýza PCR na hepatitidu C, biochemii, OAC, testy jaterních funkcí. Polymerázovou řetězovou reakcí může být virus detekován v krvi i v prvním týdnu infekce, což je dominantní výhodou metody.

Kvantitativní a kvalitativní analýza hepatitidy C a vlastnosti studie, jak se připravit, zda existují chyby, dekódování - podrobně se budeme zabývat.

Co je metoda polymerázové řetězové reakce??

Polymerázová řetězová reakce - technika molekulárního výzkumu k určení genetického materiálu virového agenta od prvních dnů infekce. Analýza je charakterizována vysokou mírou spolehlivosti, specificity, přesnosti. Díky tomu je detekována nejen nepřítomnost / přítomnost viru, ale také virová zátěž (kvantitativní hodnota), genotyp.

Studie vyžaduje krev pacienta, ve kterém je údajně lokalizována RNA virové infekce. V laboratorních podmínkách se k biologické tekutině přidávají primery - jedná se o uměle syntetizované fragmenty požadovaného genu malé délky. Plus RNA polymeráza je specializovaný enzym, který mnohonásobně zvyšuje koncentraci požadovaného materiálu..

Krev s přídavkem složek se dále zahřívá a ochlazuje několikrát ve speciálním zařízení. Následuje analýza získaných výsledků, porovnání se známými geny virového agens. Na základě toho je učiněn závěr o nemoci.

Druhy výzkumu PCR

Analýza na hepatitidu C PCR se provádí v laboratoři s přidáním nezbytných reagencií, má tři odrůdy s charakteristickými vlastnostmi:

  1. Kvalitativní analýza PCR na hepatitidu C je prvním krokem ve studii. Díky tomu je v krevním séru detekován genetický materiál patogenu.
  2. Kvantitativní studie vám umožní posoudit virovou zátěž - jedná se o obsah virového materiálu v 1 ml krve pacienta. Provádí se před začátkem léčby a poté po 1-4–12 týdnech léčby. Pokud je kurz dlouhý, musí být studie provedena po 24 týdnech léčby, aby se vyhodnotila účinnost.
  3. Genotypizace. Infekční onemocnění se vyvíjí rychle, virus má tendenci mutovat. Proto je nutné identifikovat genotyp viru.

Vědci identifikovali 7 genotypů viru. V Ruské federaci bylo 1-2-3 druhy velmi časté.

Každý z genotypů se vyznačuje rezistencí na léčbu..

Například u typu 1 je účinnost léčby asi 60%, ve srovnání s 2-3 typy, indikátor dosahuje 85%.

Pro výběr správného léku, délky léčby je nutné identifikovat nejen skutečnost infekce, ale také koncentraci viru, jeho genotyp.

Indikace pro

Markery hepatitidy, PCR a ELISA, jiné studie mají určité lékařské indikace:

  • Když má pacient v anamnéze infekci HIV, AIDS.
  • Kontakt s infikovanou osobou, protože virová hepatitida je vysoce nakažlivá.
  • Příznaky cirhózy jater - hepatomegalie, zvýšení velikosti sleziny, na břiše se objevil žilní obraz atd..
  • Klinika funkční jaterní poruchy - periodická / konstantní bolest v pravé hypochondrii, žloutnutí kůže, nevolnost.
  • Vysoké hodnoty AST a ALT v biochemii krve.
  • Během těhotenství, kdy špatné jaterní testy.
  • Před zahájením antivirového kurzu určit virové zatížení.
  • Sledovat účinnost terapie.
  • Po terapii, aby se zabránilo recidivě virové infekce.

PCR se provádí s potvrzenou diagnózou hepatitidy B, aby se vyloučila smíšená forma poškození jater.

Příprava studie a vzorkování materiálu

Jak se připravit na analýzu, řekne lékař. Pro dosažení přesného výsledku je pacientovi doporučený přípravek. Skládá se z následujících doporučení:

  1. Analýza by měla být provedena ráno, na lačný žaludek. Před odběrem krve je povoleno pít pouze čistou, nesycenou vodu. Poslední jídlo - 8 hodin před plotem.
  2. Pokud nemůžete test absolvovat ráno, můžete to udělat večer nebo na oběd, a to nejdůležitější - 5-6 hodin po jídle, ne dříve.
  3. 48 hodin před studií se vzdejte alkoholu, kofeinových nápojů, džusů.
  4. Po dobu 2 dnů musíte dodržovat dietu, vyjma všech škodlivých produktů. Někteří lékaři se však domnívají, že mastná smažená jídla nemají vliv na přesnost studií PCR..

Neužívejte léky 24 hodin před lékařskou manipulací. Pokud to není možné, informujte svého poskytovatele zdravotní péče. Analýza se nedoporučuje provádět ihned po ultrazvuku, CT, masáži a dalších fyzioterapeutických procedurách.

Odběr krve je následující:

  • Pomocí speciálního škrtidla, které je napnuté na předloktí pacienta, lékař zastaví žilní průtok krve. Žíly se stanou viditelnějšími, což usnadňuje postup pro zavedení jehly a následné odběry krve.
  • Oblast kůže před zavedením sterilní jehly je ošetřena kapalinou obsahující alkohol.
  • Jehla je vložena do žíly, poté je k ní připojena zkumavka, do které vstupuje krev.
  • Po zavedení jehly se turniket odstraní. Nasbírejte potřebné množství krve, odstraňte jehlu.
  • Na místo vpichu se aplikuje vatový tampon namočený v alkoholu..

Aby se zabránilo tvorbě modřin v místě vpichu, musí být bavlněný tampon pevně přitlačen k poraněné oblasti, ohnut paže a držen v této poloze 3-4 minuty..

Pokud pacient užívá léky, které pomáhají ředit krev (Aspirin, Warfarin), mohou se vyskytnout určité problémy se zastavením krvácení..

Výhody PCR oproti jiným testům

Metoda polymerázové řetězové reakce má určité výhody oproti jiným diagnostickým metodám..

Výhody studie jsou uvedeny v tabulce:

Přímá diagnostika patogenuDalší studie poskytují odpověď - je v těle patogen nebo ne. Ale pomocí metody PCR můžete specificky určit typ virového agenta.
Specifičnost studiePCR určuje jedinečný fragment DNA, který odpovídá pouze jednomu typu virového činidla. Tím se minimalizuje šance na chybu..
Vysoká citlivostLze detekovat i nepatrnou koncentraci viru v krvi..
Identifikace všech patogenůBěhem studie můžete detekovat všechny patogenní původce.
Skryté infekceKromě virového patogenu je možné identifikovat infekce, které mají latentní průběh, jsou charakterizovány vysokou antigenní aktivitou.

Když pacient obdrží pozitivní výsledek, bude to znamenat, že v biologické tekutině byl detekován genetický materiál patogenu hepatitidy. Negativní výsledek - žádné stopy po viru.

Rozdělení výsledků

Lékař by měl výsledky dešifrovat na základě závěru, který pacient obdrží v laboratoři. Je nutné analyzovat data ve spojení s ukazateli biochemie, OAC, ultrazvukem.

Kvalitní

Kvalitativní studie ukáže přítomnost nebo nepřítomnost původce virového onemocnění v lidské krvi. Mohou existovat dvě možnosti - negativní (norma) nebo pozitivní výsledek.

Formulář někdy říká: detekováno nebo nenalezeno.

Pozitivní výsledek - laboratorní asistent odhalil genetický materiál virového agens v krvi pacienta, infekce je potvrzena. Negativní závěr - žádná infekce, fragmenty RNA viru jsou pod hranicí citlivosti.

Kvantitativní

Kvantitativní analýza zahrnuje několik možností výsledku. Pro větší přehlednost je představíme ve formě tabulky.

VýsledekDešifrování
ZáporněTo je norma pro zdravého člověka. Studovaný biologický materiál proto neobsahuje RNA virové hepatitidy nebo je obsah nižší než prahové hodnoty citlivosti.
Až 1,8 * 10 ^ 2 IU / mlŘíká se, že obsah RNA je menší než rozsah kvantifikace. Tento výsledek by měl být interpretován pečlivě, protože je považován za kontroverzní. Kromě toho jsou prováděny další studie pro následné srovnání. Opakuje se také test PCR..
Až 8 * 10 ^ 5 IU / mlNízké virové zatížení. Takový výsledek zpravidla znamená, že léčba je účinná..
Od 8 * 10 ^ 5 IU / mlVysoká virová zátěž. Léčba je nutná okamžitě (pokud není provedena), nebo je nutná korekce medikace.
2,4 * 10 ^ 7 IU / mlRNA je větší než horní kvantifikační maximum. Na pozadí tohoto výsledku není virová zátěž posuzována. Vyžaduje se opakované ředění vzorku tělesné tekutiny..

Genotypizace

Výsledek - Byla detekována ribonukleová kyselina specifického genotypu. Dále označují genotyp a podtyp, laboratorní asistent kóduje závěr latinkou a čísly. Například genotyp 1a. Celkem 7 genotypů, 67 podtypů.

Výsledek - byla detekována RNA virové hepatitidy C - jedná se o DNA vzácného genotypu, kterou nelze připsat běžným virovým agens, proto je nutná další diagnostika.

Pokud je PCR negativní a ELISA pozitivní

Hepatolog nebo specialista na infekční choroby dešifruje závěr laboratorního asistenta. Vždy existuje riziko obdržení falešně negativního nebo falešně pozitivního výsledku. Někdy se stává, že PCR je negativní, a ELISA je pozitivní.

To znamená, že v současné době v krvi pacienta není virus, ale utrpěl akutní nemoc. Obecně se uznává, že ELISA ukazuje protilátky, které jsou produkovány imunitním systémem po invazi patogenu..

ELISA se ve srovnání s PCR vyznačuje nízkou spolehlivostí a spolehlivostí, proto se používá jako primární screening. Při diagnostice virové hepatitidy bez polymerázové řetězové reakce to nelze udělat.

Náklady na testování na hepatitidu C

Můžete provádět testy v nemocnici, kde je pacient sledován, pokud existuje jeho vlastní laboratoř, nebo se obraťte na soukromé centrum za poplatek.

V krátké době získáte výsledek v laboratorních centrech jako Hemotest, Invitro, Helix.

Náklady na výzkum v závislosti na laboratoři:

Název služby LabCenová politika
Spirála· Náklady na sběr biologického materiálu - 170 rublů.

· Kvalitativní + kvantitativní PCR test - 3990 rublů.

· Identifikace protilátek virového onemocnění - 1500 rublů (2-3 dny).

· Kontrola aktivity viru před zahájením léčby - 4090 rublů.

Invitro· Kvantitativní detekce RNA viru hepatitidy C pomocí PCR - 3140 rublů.

· Příjem biologického materiálu (žilní krev) - 199 rublů.

· Hodnocení virové zátěže s detekcí v reálném čase - 18 000 rublů.

· Vysoce kvalitní ultracitlivý test - od 3 000 rublů.

· Genotypizace - od 1250 rublů.

Hemotest· Cena za kvantitativní výzkum je 2200 rublů.

· Vysoce kvalitní diagnostika ze 700 rublů.

· Stanovení RNA patogenu - od 4 000 rublů.

· Odběr krve z žíly asi 150 rublů.

Doba trvání studie je v průměru 2–3 dny. V některých laboratořích existuje služba jako urgentní analýza, její náklady jsou 1,5 až 2krát vyšší. Je také možné zavolat lékařskému specialistovi domů, aby daroval krev a obdržel výsledky e-mailem nebo osobně při kontaktování laboratoře.